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市疾控中心建立甲型H1N1流感病毒检测方法
【2009/12/30 11:42:53】  阅读人数:7547  

市疾控中心于58建立起甲型H1N1流感病毒的实验室检测方法。在当前国际上面临甲型H1N1流感流行的严峻形势时,该方法的建立进一步提高了我市应对和处置甲型H1N1流感疫情的能力,对于保障人民群众身体健康有重要意义AG亚游平台。

20093月墨西哥发生甲型H1N1流感爆发流行以来,该病毒已经发生了多代、并广泛地人传人。由于该病病例的临床症状与季节性流感相似,缺乏特异性的表现,因此,开展病原学检测成为对该病鉴别诊断最重要的工作之一。国家CDC在最快时间内研制出核酸检测的引物和方法,并通过视频会议对网络实验室进行技术培训,市疾控中心选派技术骨干参加国家CDC和省CDC举办的相关培训,认真学习与研究甲型H1N1流感病毒的实验室检测方法,在收到国家CDC下发的甲型H1N1流感病毒检测引物和探针后,立即组织人员进行实验研究。市疾控中心从标本的采集和处理、RNA核酸提取、PCR反应试剂的选择、反应体系的配制及反应条件的设置都严格按照国家CDC下发的甲型H1N1流感病毒实验室检测操作规程进行操作,并且严格遵照国家有关甲型H1N1流感实验室生物安全和个人防护要求的相关规定,经过几次试验和摸索,准确扩增出预期片段大小的产物,初步建立起甲型H1N1流感病毒的核酸检测方法,本方法从标本处理到反应结果的判定大概需要7-8小时。

国家CDC提供的甲型H1N1流感病毒核酸检测方法有两种,一种是美国CDC公布的real-time RT-PCR法,主要有四对引物和探针,分别可以检测出甲型流感病毒、猪甲型流感病毒、猪流感病毒H1亚型,另有一对是检测人的RNaseP基因(在人细胞中广泛存在),对于人的核酸(标本为人源)可以作为内部阳性对照,避免假阴性的出现。另一种是国家CDC自己研究的RT-PCR法,主要有四对引物,分别可以检测出甲型流感病毒(所有的甲型流感病毒)、流感病毒H1N1 亚型(所有的H1N1 亚型流感病毒)、人季节性流感病毒H1N1 亚型、猪流感病毒H1亚型。由于两种方法均采用4对引物(探针),该检测方法可以准确地区分甲型与非甲型流感病毒、H1N1亚型和非H1N1亚型、人季节性流感病毒H1N1亚型与此次甲型H1N1亚型,解决了甲型H1N1流感病例临床症状与季节性流感相似的问题,因此可以快速、特异、灵敏地对可疑标本进行甲型H1N1流感病毒的快速实验室诊断。

 

    (微检科   郑友限)